Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:34 min • July 8th, 2025
Prenez une microplaque contenant des cellules de mammifères sur de la glace.
Ajoutez un milieu contenant du calcium aux puits sélectionnés et un milieu sans calcium aux autres.
Introduire les monomères d’une toxine bactérienne formant des pores. Une basse température empêche l’agrégation des monomères, facilitant la liaison au cholestérol de la membrane cellulaire.
Incuber à une température physiologique, permettant aux monomères liés au cholestérol de s’oligomériser et de s’insérer dans la membrane, formant un pore.
Dans les puits avec du calcium extracellulaire, le pore provoque un afflux de calcium.
L’afflux déclenche l’excrétion exosomale de la toxine et la refermeture de la membrane.
L’augmentation du calcium intracellulaire induit également une exocytose lysosomale, libérant une enzyme qui convertit la sphingomyéline de la membrane en céramide.
La membrane enrichie en céramides déclenche l’endocytose de la toxine, refermant la membrane.
La refermeture de la membrane est entravée dans les puits sans calcium extracellulaire.
Ajoutez de l’iodure de propidium ou PI – un colorant fluorescent – qui ne peut pas pénétrer dans les cellules avec une membrane réparée, mais pénètre dans
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