Un test pour l’analyse du cycle cellulaire des lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 6:20 min • July 8th, 2025
Prélever des cellules d’organes lymphoïdes secondaires d’une souris immunisée contre l’antigène, contenant des lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène à différents stades du cycle cellulaire.
G1, S, G2 et M sont des stades de division active des cellules, tandis que les cellules du stade G0 sont quiescentes.
Ajoutez un colorant de viabilité fluorescente pour marquer les cellules mortes et des anticorps marqués au fluorophore se liant aux marqueurs de surface des lymphocytes T CD3 et CD8.
Introduire des multimères peptide-CMH antigéniques conjugués aux fluorophores pour se lier aux récepteurs des lymphocytes T, marquant ainsi les lymphocytes T spécifiques de l’antigène.
À l’aide d’un tampon, fixez et perméabilisez les cellules.
Introduire des anticorps marqués au fluorophore pour se lier à une protéine nucléaire associée à la prolifération cellulaire, colorant ainsi les cellules en division active.
Ajoutez une coloration fluorescente pour marquer l’ADN.
À l’aide de la cytométrie en flux, sélectionnez les cellules vivantes et identifiez les lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène à l’aide des marqueurs liés à la surface.
L’intensité de la coloration de l’ADN distingue les c
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques