Utilisation de sondes de tension basées sur l’ADN pour évaluer les forces des récepteurs appliquées par les cellules immunitaires

Commencez avec une lamelle en verre fonctionnalisée avec des nanoparticules d’or ancrées au polyéthylène glycol.

Ajoutez des sondes de tension en épingle à cheveux à ADN contenant une épingle à cheveux à ADN hybridée avec deux oligonucléotides dans des bras opposés.

Le brin ligand comprend un fluorophore et de la biotine, tandis que le brin d’ancrage contient un quencher et un groupe thiol. Dans cette configuration, le quencher supprime la fluorescence.

Les sondes d’ADN se lient aux nanoparticules d’or, s’ancrant à la lamelle de verre.

Introduire la streptavidine, en interagissant avec les molécules de biotine des brins de ligand.

Ajoutez des ligands biotinylés qui se lient aux molécules de streptavidine préliées.

Recouvrir la lamelle avec des lymphocytes T CD8 positifs ; leurs récepteurs interagissent avec les ligands immobilisés, formant un site d’interaction récepteur-ligand.

Cette interaction génère une force qui déplie la structure de l’épingle à cheveux de l’ADN, séparant le fluorophore du quencher et favorisant l’émission de fluorescence.

Introduisez des brins verrouillables non fluorescents qui interagissent avec les segments dépliés des sondes pour préserver le signal de f