Un test basé sur le CFSE pour surveiller la migration des cellules dendritiques de la peau vers les ganglions lymphatiques drainants chez des souris infectées
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:34 min • July 8th, 2025
Prenez une souris anesthésiée. Injectez la suspension de BCG de Mycobacterium bovis dans le coussinet de la patte arrière.
Les cellules dendritiques de la peau reconnaissent et phagocytent les mycobactéries.
De plus, les composants mycobactériens traités sont présentés sur des molécules de CMH de classe II.
Injectez le colorant CFSE perméable aux cellules dans le même coussinet plantaire.
Les estérases intracellulaires clivent le CFSE en un produit fluorescent imperméable aux cellules, colorant les cellules.
De plus, les cellules dendritiques activées migrent via les vaisseaux lymphatiques vers le ganglion lymphatique poplité, activant les lymphocytes T.
Exciser chirurgicalement le ganglion lymphatique poplité et l’homogénéiser à travers une passoire, obtenant une suspension unicellulaire.
Centrifugez et remettez les cellules en suspension dans un tampon.
Transférez les cellules dans un tube de cytométrie en flux. Centrifugez et traitez les cellules avec un cocktail d’anticorps.
Les anticorps bloquants de Fc bloquent les récepteurs Fc, tandis que les anticorps marqués au fluorophore se lient aux marqueurs de surface CD11c et aux molécules de classe II du CMH sur les cellules immuni
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