Un essai d’inhibition différée de la croissance pour évaluer l’effet des composés antimicrobiens dérivés de bactéries

Commencez par une plaque de gélose contenant des nutriments et placez une goutte d’une culture nocturne de bactéries primaires productrices d’inhibiteurs au centre.

Laissez la culture sécher, en assurant une propagation minimale des bactéries, et incubez.

Les bactéries individuelles forment des colonies distinctes et sécrètent des composés antimicrobiens – des molécules inhibitrices qui diffusent à travers la gélose jusqu’à une certaine distance.

Vaporisez uniformément une culture diluée d’une souche bactérienne concurrente sur la surface de la gélose qui contient des colonies de bactéries primaires.

Pendant l’incubation, les composés antimicrobiens interagissent avec les bactéries concurrentes et perturbent leurs processus cellulaires essentiels.

Cela entraîne la mort des bactéries concurrentes dans cette zone spécifique, provoquant une baisse significative de la croissance bactérienne.

Dans la zone sans composés antimicrobiens, les bactéries concurrentes utilisent les nutriments et forment des colonies distinctes.

Cela crée un schéma de croissance différentiel avec une zone d’inhibition distincte. Déterminez le diamètre de cette zone et la clarté de la zone pour évaluer l’effet des composés antimicrobiens dérivés de bactéries.

Pour préparer des cultures bactériennes pendant la nuit, striez les souches concurrentes et inhibitrices sur une plaque de gélose BHI stérile et incubez à 37 degrés Celsius en aérobie pendant environ 18 heures. Dans une bouteille universelle de 28 millilitres, inoculez 10 millilitres de bouillon BHI stérile avec une seule colonie de la souche bactérienne concurrente requise.

Incuber la culture dans un agitateur orbital universel à 37 degrés Celsius et 250 tr/min pendant la nuit. Le lendemain, assurez-vous que les plaques de gélose sont complètement sèches et qu’il n’y a pas de condensation sur le couvercle pour éviter que l’inoculation ne se propage sur la plaque. Pipetez 25 microlitres de la culture de nuit au centre des plaques de gélose, en évitant d’enfoncer complètement le piston de la pipette pour éviter les bulles d’air qui pulvérisent la culture sur la gélose.

Laissez sécher la culture à température ambiante pour limiter la propagation de la culture. Ensuite, incubez les plaques de gélose à 37 degrés Celsius en aérobie pendant la nuit. Après avoir cultivé une culture pendant la nuit tout en travaillant sous une enceinte de sécurité de niveau 2 recouverte de papier absorbant, utilisez du bouillon BHI pour diluer la culture dix fois pour obtenir environ 4 fois 10 à la sixième UFC par millilitre. Ensuite, versez la culture diluée dans un flacon de vaporisateur de parfum en plastique stérile.

Pour effectuer un essai d’inhibition différée de la croissance, vaporisez la culture à travers chacun des flacons du vaporisateur pour vous assurer que la culture est chargée dans le mécanisme de pulvérisation avant de pulvériser sur la gélose. À une distance d’environ 15 centimètres au-dessus de la gélose, vaporisez environ 250 microlitres de culture diluée sur toute la surface de la gélose. Incuber les plaques à 37 degrés Celsius en aérobie pendant la nuit.

Pour interpréter l’inhibition différée de la croissance, mesurez la zone d’inhibition de la croissance de la souche concurrente pulvérisée en millimètres, en soustrayant le diamètre de la tache centrale du producteur de l’inhibiteur. Enfin, notez le score de clarté des zones d’inhibition selon le protocole textuel.