Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez une culture de macrophages dérivés de la moelle osseuse. Retirez le milieu et ajoutez la bactérie Salmonella, exprimant une protéine cytoplasmique fluorescente.
Centrifuger pour faciliter le contact bactéries-macrophages et incuber.
Les bactéries se lient aux récepteurs des macrophages, facilitant l’internalisation à l’intérieur d’un phagosome.
Le phagosome fusionne avec les vésicules dérivées de l’endosome et, simultanément, les bactéries sécrètent des effecteurs, remodelant le phagosome en une vacuole contenant Salmonella ou SCV.
Un sous-ensemble de SCV se rompt, libérant des bactéries internalisées dans le cytoplasme.
Ajoutez un antibiotique pour éliminer les bactéries non internalisées. Aspirez le milieu contenant les bactéries mortes.
Introduisez un tampon contenant le détergent digitonine, qui se lie au cholestérol.
La liaison de la digoninine à la membrane plasmique riche en cholestérol entraîne la formation de pores, tandis que la membrane SCV déficiente en cholestérol reste intacte - un phénomène appelé perméabilisation différentielle.
Ajoutez des anticorps marqués par fluorescence qui pénètrent dans les cellules perméabilisées pour se lier aux bactéries cytosolique
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