Un test cellulaire pour l’identification d’agents interagissant avec CXCR4

Prenez une plaque multipuits recouverte de gélatine contenant des cellules cancéreuses du cerveau humain adhérentes exprimant CXCR4.

Remplacez le support par un colorant sensible au calcium. Les estérases intracellulaires clivent le colorant en un produit imperméable à la membrane qui se lie aux ions calcium, présentant une fluorescence accrue.

Retirez le colorant, lavez et ajoutez du tampon.

Placez la plaque dans un lecteur de microplaques à fluorescence avec un composé interagissant avec CXCR4 et des plaques contenant des plaques contenant des chimiokines CXCL12.

À l’aide de paramètres automatisés définis, injectez des concentrations croissantes de composés dans les puits d’essai, suivies d’une concentration spécifique de CXCL12.

Dans les puits de contrôle sans composé, CXCL12 se lie à CXCR4.

Cette liaison active une cascade de signalisation, libérant des ions calcium dans le cytoplasme, où ils se lient au colorant, intensifiant ainsi la fluorescence.

Cependant, dans les puits d’essai, les composés en interaction inhibent la liaison de CXCL12 à CXCR4, affectant la mobilisation du calcium et provoquant une diminution de la fluorescence dose-dépendante, confirmant qu’ils sont des a