Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:20 min • July 8th, 2025
La α-galactosidase A et la α-glucosidase acide sont des enzymes lysosomales cruciales pour le métabolisme cellulaire.
La α-galactosidase A décompose les substrats tels que les glycolipides, tandis que la α-glucosidase acide hydrolyse le glycogène.
Pour mesurer leur activité enzymatique in vitro, prélever des puits à plaques multipuits avec des échantillons contenant des concentrations connues de α-galactosidase A et de α-glucosidase acide, respectivement.
Ajoutez le volume requis de solutions acides de substrats synthétiques de 4-méthylumbellifèreryl dans les puits, des substrats fluorogéniques spécifiques conçus pour imiter les substrats naturels de ces enzymes.
Incuber dans l’obscurité.
La α-galactosidase A et les enzymes α-glucosidase acide clivent leurs substrats respectifs, libérant le produit fluorescent, la 4-méthylombelliférone.
Ajouter un tampon alcalin pour terminer la réaction enzymatique.
À l’aide d’un lecteur de fluorescence de microplaques, mesurez l’intensité de fluorescence de la 4-méthylumbelliférone dans les puits, indicative de sa concentration, afin de déterminer l’activité enzymatique de la α-galactosidase A et de la α-glucosidase acide, respectivement.
Diluez
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