Un test d’attachement viral pour le criblage de composés antiviraux

Commencez avec une plaque multi-puits contenant une monocouche de cellules d’hépatome humain pré-refroidie.

Traitez les puits d’essai avec un mélange de virus de l’hépatite C génétiquement modifié portant le gène de la luciférase et d’un composé cible ; traitez les puits de contrôle avec le virus seul.

Dans les puits d’essai, les molécules cibles interagissent avec les glycoprotéines virales et les récepteurs de surface cellulaire, empêchant ainsi l’attachement viral.

Cependant, dans les puits de contrôle, les glycoprotéines virales interagissent avec les récepteurs de surface cellulaire, ce qui permet leur fixation. Une basse température inhibe l’entrée virale.

Retirez le surnageant, introduisez un milieu et incubez à nouveau à la température optimale, facilitant ainsi l’entrée virale.

À l’entrée, le virus libère le matériel génétique, initiant la synthèse des protéines virales et des enzymes luciférase, qui sont sécrétées dans le milieu.

Transférez le surnageant contenant de la luciférase et introduisez un substrat.

L’interaction enzyme-substrat produit de la lumière proportionnellement aux niveaux de luciférase.

L’intensité lumineuse plus faible dans les puits de test, par rappo