Un test pour évaluer l’effet des composés testés sur l’entrée virale et la fusion dans les cellules hôtes

Prenez des cellules cancéreuses du foie et incubez-les à basse température pour altérer l’endocytose.

Introduire un virus de l’hépatite C recombinant ou VHC, composé d’un génome d’ARN modifié codant pour un rapporteur de luciférase sécrété.

Les lipoprotéines virales interagissent avec les protéoglycanes des cellules hôtes, tandis que les glycoprotéines de l’enveloppe virale se lient à des récepteurs spécifiques de l’hôte.

Dans les puits sélectionnés, ajoutez le composé d’essai qui se lie aux glycoprotéines virales.

Lors de l’incubation à température physiologique, les virus liés sont endocytosés.

Jetez les virus non internalisés, ajoutez un milieu de croissance et incuberez.

Dans les puits non traités, les glycoprotéines favorisent la fusion enveloppe-endosome viral, libérant la nucléocapside, tandis que le masquage composé nuit à la fusion dans les puits traités.

Lors de sa libération, l’ARN exprime des protéines virales, y compris la luciférase qui est sécrétée extracellulairement.

Récoltez le surnageant contenant de la luciférase et ajoutez un substrat bioluminescent, qui est oxydé par la luciférase pour émettre de la lumière.

Une diminution de la luminescence dans les puits tra