Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:04 min • July 8th, 2025
Commencez par un ADN clivage de l’ARNAzyme, un ADN catalytique qui, en se liant à un biomarqueur bactérien spécifique, est activé.
L’ADN est lié à une perle magnétique enrobée de streptavidine via la biotine à son extrémité 5'. À l’extrémité 3', il est lié à une uréase liée à un oligonucléotide, formant une bille magnétique fonctionnelle.
À un tube contenant des billes magnétiques fonctionnelles, ajoutez un lysat d’E. coli.
Un biomarqueur spécifique d’E. coli du lysat active l’ADN zymé, déclenchant le clivage de la liaison ARN, provoquant le détachement du conjugué ADNenzyme-uréase.
Utilisez un support magnétique pour immobiliser les billes et retirer le conjugué DNAzyme-uréase lié aux billes.
Transférez le surnageant contenant de l’uréase libéré dans un autre tube.
Ajoutez un colorant indicateur de pH - rouge de phénol - et une solution d’urée.
L’uréase hydrolyse l’urée en ammoniac et en dioxyde de carbone.
L’ammoniac, une base faible, augmente le pH de la solution, provoquant un changement de couleur, ce qui indique la présence du biomarqueur E. coli.
Après avoir préparé des cellules E. coli selon le protocole de texte, prélaver un tube de microfuge de 1,5 millilitre en ajoutant
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