Un test in vitro pour évaluer l’impact immunomodulateur des monocytes sur la prolifération des leucocytes

Prenez une plaque multi-puits avec une culture de cellules souches mésenchymateuses adhérentes, ou CSM.

Ajoutez des cellules mononucléées du sang périphérique, ou PBMC, et incubez.

Les CSM sécrètent un facteur de croissance hépatocytaire, incitant les monocytes à acquérir un phénotype immunomodulateur, produisant de l’interleukine-10 ou IL-10.

Transvasez le surnageant contenant des PBMC dans un tube.

Ajouter des billes magnétiques enrobées d’anticorps se liant au marqueur de surface de monocyte CD14.

Utilisez un séparateur magnétique pour isoler les monocytes CD14+ et ajoutez-les aux puits à plaques multipuits à des concentrations croissantes.

Introduire des lymphocytes T CD4+ effecteurs marqués au CFSE fluorescent.

Ajoutez des microbilles conjuguées à des anticorps qui se lient spécifiquement aux marqueurs de surface des lymphocytes T CD3 et CD28, activant ainsi les cellules.

Dans le contrôle des monocytes bien dépourvus, les lymphocytes T activés prolifèrent, chaque division cellulaire diminuant l’intensité de la fluorescence CFSE dans les cellules filles.

Cependant, dans les co-cultures, les monocytes induits par les CSM sécrètent de l’IL-10, supprimant la prolifération des lymp