Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prendre une plaque multipuits contenant des bactéries entériques pathogènes dans un milieu de croissance.
Le milieu dans les puits sélectionnés contient des sels biliaires - ou des molécules amphipathiques avec une activité détergente - imitant des conditions de croissance difficiles.
Les sels biliaires perturbent la membrane bactérienne et endommagent l’ADN et les protéines.
En tant que contre-mécanisme, les bactéries forment un biofilm – une communauté bactérienne structurée enfermée dans une matrice autoproduite de substances polymères extracellulaires, ou EPS, contenant des polysaccharides, des protéines, des lipides et des acides nucléiques d’origine microbienne.
La couche d’EPS protège les bactéries de l’exposition aux sels biliaires.
Après l’incubation, aspirez le milieu pour éliminer les bactéries flottantes.
Traiter avec un tampon de fixation pour préserver l’architecture du biofilm, et laver pour éliminer l’excès de tampon.
Ajoutez du Concanavalin A marqué par fluorescence - une lectine qui se lie aux polysaccharides EPS, marquant le biofilm. Laver pour enlever l’excédent de Concanavalin A.
À l’aide d’un lecteur de plaques, mesurez la fluorescence. Une intensité de fluore
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