Procédé de préparation d’échantillons pour visualiser des bactéries formant un biofilm sur des hyphes fongiques

Introduire une colonie fongique liée à la cellophane dans une suspension bactérienne marquée par fluorescence. Retirez le cellophane et incubez.

Les cellules bactériennes adhèrent à la surface fongique via des molécules de surface et des récepteurs. Les bactéries adhérentes sécrètent des substances polymères extracellulaires composées de polysaccharides, de protéines et d’ADN, piégeant les cellules bactériennes et formant la base structurelle du biofilm.

Rincez la section dans une solution saline forte pour éliminer les bactéries faiblement liées

Dans un tampon phosphaté, coupez une section de la colonie.

Transférez la section dans de l’eau stérile contenant de l’agglutinine de germe de blé, ou WGA liée à un colorant fluorescent rouge.

Le WGA, une protéine végétale, se lie aux résidus de N-acétylglucosamine et d’acide sialique, ce qui permet au colorant attaché d’être fluorescent sur la paroi cellulaire fongique.

Rincez la section dans un tampon de phosphate.

Immergez partiellement une diapositive dans la mémoire tampon. Laissez la section flotter dessus. Soulevez doucement pour que la section se dépose sans perturber le biofilm.

Placez un support de montage, suivi d’une lamelle po