Un test pour la surveillance en temps réel du pH extracellulaire dans les biofilms dentaires

Prenez une plaque multi-puits contenant une solution salivaire à pH neutre complétée par du glucose.

Ajoutez un colorant proportionnel à double émission, sensible au pH.

Placez la plaque sur une platine de microscope confocal.

Introduisez une plaque de verre avec un biofilm dentaire collé dans le puits vers le bas.

Les bactéries du biofilm fermentent le glucose, générant des acides organiques et abaissant le pH à proximité.

Le pH acide protone le colorant, provoquant son internalisation et sa concentration accrue dans les bactéries, les colorant, tandis que le colorant déprotoné reste extracellulaire.

Au fil du temps, le pH devient acide dans d’autres zones du biofilm.

Lors de l’excitation laser, le colorant protoné présente un décalage de l’émission de fluorescence par rapport à sa forme déprotonée.

Capturez des images fluorescentes à des intervalles spécifiés.

À l’aide d’un logiciel approprié, éliminez les signaux de fluorescence d’origine bactérienne.

Calculer le rapport des intensités d’émission fluorescente de la matrice extracellulaire à deux longueurs d’onde spécifiques, en corrélation avec les valeurs de pH.

Déterminer la diminution du pH du biofilm extracellulaire suite au