Analyse en temps réel de la migration des lymphocytes T résidents dans différentes régions tumorales à l’aide de la microscopie confocale
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:23 min • July 8th, 2025
Commencez par une tranche de tumeur pulmonaire contenant des cellules T résidentes.
Les lymphocytes T migrent à travers le microenvironnement tumoral et interagissent avec les cellules tumorales et les éléments stromaux, remplissant ainsi des fonctions immunitaires.
La composition du microenvironnement tumoral influence fortement le déplacement et la vitesse des lymphocytes T.
Ajoutez des anticorps distincts couplés par fluorescence pour marquer les lymphocytes T, les cellules tumorales et les éléments stromaux dans le microenvironnement.
Ajoutez du DAPI, qui infiltre les cellules dont la membrane plasmique est endommagée pour colorer le noyau, permettant ainsi de visualiser les régions nécrotiques de la tumeur.
Observez l’échantillon coloré au microscope confocal.
À l’aide d’une lumière de fluorescence appropriée, sélectionnez une région tumorale d’intérêt contenant des lymphocytes T résidents. Évaluez la viabilité cellulaire en évaluant les cellules DAPI-positives.
Pour une analyse en temps réel, définissez les intervalles de temps et la durée totale d’enregistrement.
Pour capturer des images de la pile z, commencez à une profondeur inférieure aux cellules T étiquetées et capture
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