Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:11 min • July 8th, 2025
Prenons une culture cellulaire de mammifère exprimant le domaine répété de la protéine de liaison aux microtubules tau.
Ces rapporteurs tau cytoplasmiques possèdent une mutation sujette à l’agrégation et existent sous forme de monomères.
Les rapporteurs sont fusionnés au fluorophore A ou B, le spectre d’émission du premier chevauchant le spectre d’absorption du second.
Ajoutez un liposome complexé avec des graines de tau ou des agrégats fibrillaires de tau pleine longueur.
En entrant dans la cellule, le liposome libère les graines dans le cytoplasme.
Les graines libérées médient l’agrégation des rapporteurs tau, amenant le fluorophore A près du fluorophore B.
Ajoutez de la trypsine pour détacher les cellules, puis effectuez la fixation.
Analysez les cellules à l’aide d’un cytomètre en flux.
En raison de la proximité au sein de l’agrégat, lors de l’excitation, le transfert d’énergie du fluorophore A à B via une interaction dipôle-dipôle est appelé transfert d’énergie de résonance de fluorescence ou FRET.
Le fluorophore B excité émet un signal FRET, dont la présence indique l’agrégation des protéines.
Pour replaquer les cellules du biocapteur dans des conditions stériles, rincez chaq
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