Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez des dilutions en série d’anticorps spécifiques du cytomégalovirus humain, ou HCMV.
Lors de l’ajout de HCMV, les anticorps se lient à la glycoprotéine B sur l’enveloppe virale, neutralisant ainsi le virus.
Transférez le mélange sur des fibroblastes humains et incuberez.
Un complexe glycoprotéique trimère sur les virus non neutralisés se lie à des récepteurs cellulaires spécifiques, déclenchant la fusion membranaire virus-hôte médiée par la glycoprotéine B et libérant la nucléocapside contenant de l’ADN génomique à l’intérieur.
Le génome libéré pénètre dans le noyau, codant pour des protéines immédiatement localisées dans le nuclé, ou IE.
La neutralisation des anticorps empêche l’entrée virale dans les cellules.
Supprimez les virus non internalisés. Traiter à l’éthanol à une température négative pour fixer et perméabiliser les cellules.
Introduire un anticorps primaire qui se lie aux protéines IE.
Ajoutez un anticorps secondaire conjugué au fluorophore qui se lie à l’anticorps primaire et un colorant fluorescent qui se lie à l’ADN.
Au microscope, détectez les cellules à double coloration infectées par un virus. Calculez le pourcentage de cellules infectées pour déterminer la n
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