Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:50 min • January 15th, 2026
Commencez avec un tube contenant des neutrophiles. Ajoutez un tampon contenant un inhibiteur de protéinase pour empêcher la dégradation des protéines.
Ajouter un détergent adapté pour perméabiliser la membrane des neutrophiles
Dans un bain de glace, sonifiez l’échantillon avec des ondes sonores à haute fréquence pour perturber la membrane cellulaire, libérant ainsi le contenu intracellulaire, y compris diverses protéines.
Centrifugez brièvement pour recueillir le contenu des parois du tube et transférez-le dans un tube approprié.
Introduisez un agent réducteur et incubez à haute température pour favoriser le clivage de la liaison disulfure, provoquant la dénaturation des protéines.
Refroidir et introduire un réactif alkylant qui alkyle les groupes sulfhydryles.
Ajoutez de l’acétone froide pour induire la précipitation des protéines.
Centrifugeuse pour granuler les protéines et les fragments cellulaires. Retirez le surnageant et séchez-le à l’air.
Introduisez un tampon contenant un agent dénaturant et du sonicate pour re-solubiliser la pastille de protéine.
Enfin, ajoutez un mélange de protéases qui clive les protéines. Stockez l’échantillon pour un traitement ultérieur.
Pour commen
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