Évaluation des anticorps neutralisants fonctionnels du SRAS-CoV-2

Commencez par du sérum humain dilué en série contenant des concentrations variables d’anticorps neutralisants contre le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère ou le SRAS-CoV-2.

Introduire des virus pseudotypés avec l’ARN luciférase, l’intégrase et la transcriptase inverse, encapsulés dans une bicouche lipidique contenant les protéines de pointe du SRAS-CoV-2.

Les anticorps neutralisent les virus en fonction de la dilution sérique, les dilutions inférieures présentant une neutralisation maximale.

Introduire des cellules cibles exprimant les récepteurs de l’enzyme de conversion de l’angiotensine-2 ou les récepteurs ACE2 et la protéase transmembranaire sérine-2 ou TMPRSS2.

Dans des dilutions sériques plus élevées, les virus non neutralisés interagissent avec les récepteurs ACE2, tandis que TMPRSS2 clive la protéine de pointe, permettant la fusion des virus.

À l’entrée, l’ARN de la luciférase est transcrit en ADN qui s’intègre dans le génome de l’hôte et produit l’enzyme luciférase.

Remplacez le milieu par un tampon d’essai contenant un substrat de luciférase et un agent de lyse.

Les cellules se lysent, libérant de la luciférase intracellulaire, qui interagit avec le substr