Tests pour l’évaluation qualitative et quantitative des concentrations de glucose dans l’urine de souris

Prenez une goutte d’urine de souris fraîche et immergez-y une bandelette de détection de glucose contenant de la glucose oxydase, de la peroxydase et du chromogène.

La glucose oxydase oxyde le glucose dans l’urine, formant de la gluconolactone et du peroxyde d’hydrogène.

De plus, la peroxydase utilise du peroxyde d’hydrogène pour catalyser l’oxydation du chromogène, formant un produit coloré, avec une intensité proportionnelle à la concentration de glucose dans l’urine.

Comparez la couleur avec le tableau de référence de la bandelette pour une évaluation qualitative de la glycémie dans l’urine.

Pour une mesure quantitative de la glycémie dans l’urine, prenez une plaque multipuits avec des étalons de concentration de glucose et l’échantillon d’urine de souris prélevé sur une période définie.

Ajouter un mélange de dosage contenant de la glucose oxydase, de la peroxydase et des réactifs de couplage d’indicateurs.

La glucose oxydase facilite l’oxydation du glucose, formant de la gluconolactone et du peroxyde d’hydrogène. La peroxydase catalyse la réaction entre les réactifs de couplage et le peroxyde d’hydrogène, formant un produit de couleur rose.

À l’aide d’un lecteur de microplaques, mesurez l’absorbance du produit coloré.

À l’aide de la courbe étalon de glucose générée, déterminez la concentration de glucose dans l’urine.

Commencez par placer un morceau de parafilm propre sur une surface plane. Saisissez doucement la souris par la queue et posez-la sur le parafilm.

Retenez la souris par la peau à l’aide du pouce et de l’index, ce qui fait uriner la souris en réponse au stress. Laissez tomber une goutte d’urine sur la surface du parafilm, puis remettez la souris dans sa cage.

Trempez l’extrémité réactive d’une bandelette de détection de glucose dans la goutte d’urine fraîche. Retirez immédiatement la bande et posez-la à plat sur une surface avec la couleur vers le haut. Ensuite, attendez au moins 30 secondes qu’une couleur se développe complètement sur la bande. Comparez la couleur développée avec le tableau de référence fourni par le fabricant.

Assemblez la cage métabolique selon les instructions du fabricant et remplissez l’ensemble d’aliments avec de la nourriture en poudre, puis fixez-le à la languette métallique appropriée sur la chambre supérieure.

Fixez le support de la bouteille d’eau à la languette métallique restante sur la chambre supérieure. Remplissez la bouteille d’eau vide et glissez-la dans le support de la bouteille, en vous assurant que le tube de la bouteille est dans le trou.

Placez une seule souris dans la cage métabolique et couvrez-la avec le couvercle, en vous assurant que le couvercle de la cage est correctement installé. Placez le tube de collecte d’urine et le tube de collecte des matières fécales à leurs emplacements respectifs dans le plancher de la chambre inférieure.

Après 24 heures, récupérez le tube de prélèvement d’urine et effectuez un test de glucose pour déterminer la concentration de glucose dans l’urine. Si le dosage du glucose n’est pas effectué le même jour, congelez l’échantillon d’urine dans un congélateur à moins 80 degrés Celsius.

Si vous utilisez un échantillon d’urine congelé, décongelez-le d’abord. Préparez huit étalons allant de 25 à 0 milligramme par décilitre, selon les instructions du kit de test.

Préparez les puits standard et les puits d’échantillons d’urine dans une plaque de 96 puits, le tout en double, conformément au manuel de la trousse. Amorcez la réaction en ajoutant la quantité recommandée de mélange d’enzymes dans tous les puits. Couvrez l’assiette et laissez-la incuber pendant 10 minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, lisez l’absorbance à 500 à 520 nanomètres à l’aide d’un lecteur de plaques.

Analysez les données selon les instructions du kit de dosage et tracez l’absorbance de chaque étalon en fonction de la concentration de glucose. Utilisez ce graphique pour déterminer la concentration de glucose de l’échantillon d’urine de 24 heures. Si la concentration d’urine est en dehors de la plage standard, diluez l’échantillon d’urine.