Isolement de lymphocytes T tueurs naturels invariants à partir d’un modèle murin

Commencez par injecter par voie intrapéritonéale un glycolipide synthétique dans une souris.

Les cellules présentatrices d’antigènes, ou APC, internalisent le glycolipide et le présentent via la molécule non classique du CMH CD1d.

Les APC migrent vers la rate et interagissent avec les lymphocytes T tueurs naturels invariants ou cellules iNKT, induisant l’activation et la prolifération des cellules iNKT.

Récoltez la rate. Dissociez-le mécaniquement pour générer une suspension unicellulaire.

Transférez les cellules dans un tube. Ajouter un milieu à gradient de densité et centrifuger pour séparer les lymphocytes.

Prélever les lymphocytes. Ajoutez des tétramères CD1d marqués au fluorophore chargés d’antigènes glycolipidiques qui interagissent avec les cellules iNKT.

Retirer les tétramères non liés. Recouvrir de microbilles magnétiques qui se lient aux fluorophores liés au tétramère.

Retirez les billes déliées et chargez la suspension de la cellule sur une colonne magnétique.

Sous le champ magnétique, les cellules iNKT liées à des billes sont retenues dans la colonne tandis que les cellules restantes s’écoulent.

Retirez la colonne du champ magnétique. Ajouter un tampon d’élution pour él