Une technique ex vivo pour fabriquer des lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique

Prenez des lymphocytes T primaires, mélangés à des billes magnétiques conjuguées à des anticorps dans un milieu supplémenté en interleukine-2, et incubez.

Les anticorps se lient à CD3 dans le complexe récepteur des lymphocytes T et le récepteur co-stimulateur CD28, tandis que l’interleukine-2 se lie à son récepteur apparenté, provoquant l’activation et la prolifération des lymphocytes T.

Introduire des vecteurs lentiviraux avec un ARN transgénique codant pour un récepteur antigénique chimérique ou CAR, et incuber.

Lors de la fusion membranaire vecteur-cellule, l’ARN viral subit une transcription inverse en ADN, s’intégrant dans le génome de l’hôte.

Les lymphocytes T transduits expriment des CARs liés à la surface.

Récoltez les cellules à des intervalles définis.

Pour la cryoconservation, prélevez une aliquote de cellules, détachez les billes liées par pipetage et séparez-les magnétiquement.

Faites tourner les cellules et mettez-les en suspension dans un milieu de cryoconservation.

Congelez les cellules et stockez-les à une température cryogénique.

Pour évaluer l’expression des CAR, prenez une autre aliquote de cellules, faites tourner les cellules vers le bas et mettez-les en suspe