Une technique de greffe de peau humaine dans un modèle murin
JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 3:35 min • July 8th, 2025
Commencez avec une souris anesthésiée, non obèse, diabétique et immunodéficiente qui manque de diverses cellules immunitaires.
La souris est prétraitée avec des anticorps pour bloquer les récepteurs de surface des neutrophiles et supprimer la réponse immunitaire.
Excisez la peau du dos de la souris sans endommager le tissu conjonctif et créez un lit de greffe.
Placez une peau humaine de double épaisseur, comprenant l’épiderme et une partie du derme, sur le lit de greffe, l’épiderme vers le haut.
Fixez-le avec de la colle et bandez-le pour minimiser les infections et restreindre le tissu du greffon.
Pendant la récupération, le tissu greffé reçoit de l’oxygène et des nutriments de la peau de la souris, facilitant ainsi sa fixation.
Au fil du temps, des vaisseaux sanguins se développent entre la peau humaine et la peau de la souris.
Cela permet d’établir la circulation et l’infiltration des cellules immunitaires humaines, ce qui permet d’obtenir une greffe de peau humaine réussie dans le modèle murin.
Après avoir transféré la souris au poste opératoire, stérilisez la zone chirurgicale et placez une pellicule plastique stérile sur la souris. Découpez une fenêtre dans le plastique légèrement plus grande que la taille de la zone à greffer.
Maintenez fermement la peau du donneur en place avec le dos de la pince et coupez une partie de la peau du donneur en forme de rectangle de 10 x 10 millimètres à greffer le long de la pince avec un scalpel. Éloignez la peau du corps pour éviter de couper profondément le fascia. Pour créer un lit de greffe, coupez une zone rectangulaire de peau de souris, correspondant à la taille du morceau de peau du donneur.
Ensuite, placez le morceau de peau du donneur avec l’épiderme vers le haut sur le lit de greffe préparé. À l’aide de l’arrière de la pince, manipulez la peau en la faisant glisser d’avant en arrière jusqu’à ce que la peau du donneur repose complètement à plat contre le lit de greffe.
Ajoutez des gouttes adhésives pour tissu de colle chirurgicale à l’endroit où la peau du donneur rencontre la peau de la souris et de la souris et du donneur et maintenez la peau de la souris et du donneur ensemble avec une pince pendant une à deux secondes pour que la colle adhère aux tissus. Scellez complètement le bord de la greffe et laissez la colle sécher complètement.
Ensuite, coupez de la gaze de vaseline suffisamment grande pour couvrir complètement la zone de greffe. Couvrez le greffon avec la gaze de vaseline et appuyez légèrement la gaze contre la peau à l’aide d’une pince. Coupez une bande d’un film transparent dans le sens de la longueur de manière à ce que la largeur soit suffisamment grande pour couvrir la blessure de la souris.
Appuyez fermement sur le pansement transparent avec le côté adhésif vers le bas sur la gaze. Roulez rapidement la souris pour enrouler complètement le pansement autour du torse, en vous assurant qu’il est bien ajusté sans entraver la respiration et que tous les membres sont libres de mouvement.
Après avoir placé la souris dans une cage de récupération, surveillez-la jusqu’à ce qu’elle soit alerte et qu’elle se déplace. Fournir une source de chaleur sur la partie de la cage pendant au moins 15 minutes après la récupération.
Aperçu
Cette étude décrit une méthode permettant une greffe cutanée humaine réussie dans un modèle murin. La procédure implique l'utilisation d'une souris immunodéficiente afin de faciliter l'attachement et l'intégration de la peau humaine.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Biologie de la transplantation
- Immunologie
- Médecine régénérative
Contexte
- La greffe de peau est une procédure courante en médecine régénérative.
- Les souris immunodéficientes sont utilisées pour étudier l'intégration de tissus humains.
- Comprendre l'acceptation de la greffe est essentiel pour améliorer les résultats des transplantations.
- Des études antérieures ont montré des taux de réussite variables concernant l'intégration des greffes.
Objectif de l'étude
- Établir une méthode fiable pour la greffe de peau humaine chez la souris.
- Étudier le processus d'intégration de la peau humaine avec le tissu murin.
- Évaluer le rôle de la suppression immunitaire dans l'acceptation de la greffe.
Méthodes utilisées
- Préparation d'un modèle de souris immunodéficiente.
- Application d'anticorps pour bloquer les récepteurs des neutrophiles.
- Création d'un lit de greffe sur le dos de la souris.
- Fixation de greffons cutanés humains à l'aide de colle chirurgicale et de pansements.
Résultats principaux
- Fixation réussie de la peau humaine sur le lit de greffe.
- Formation de vaisseaux sanguins entre les tissus humains et murins.
- Intégration des cellules immunitaires humaines dans la greffe.
- Mise en évidence d'une meilleure acceptation de la greffe dans le modèle immunodéficient.
Conclusions
- La méthode fournit une approche viable pour l'étude des greffes cutanées humaines.
- Les résultats contribuent à la compréhension des mécanismes d'intégration des greffes.
- De futures études pourraient explorer les résultats à long terme et les réponses immunitaires.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
La mise en place d'un engraftement fiable de tissus humains dans des modèles précliniques est essentielle pour réduire les risques associés aux candidats en immunothérapie et en médecine régénérative. Ce modèle de xénogreffe permet une évaluation directe de l'intégration de la peau humaine et de l'infiltration des cellules immunitaires sous immunosuppression contrôlée, soutenant ainsi la validation de cibles en dermatologie et en biologie des transplantations. Cette approche fournit une plateforme reproductible pour le criblage mécanistique des interactions greffon-hôte avant les études permettant le dépôt d'une demande d'essai clinique (IND).
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation des mécanismes spécifiques à l'humain de trafic et d'engraftement des cellules immunitaires in vivo.
- Valeur opérationnelle : Utilise un greffage chirurgical standardisé afin de réduire la variabilité dans la préparation des modèles précliniques.
- Valeur prédictive : Permet l'évaluation de composés immunomodulateurs sur l'acceptation de tissus humains dans un système murin.
Développement de tests et criblage
- Prêt pour les tests : Génère des greffes cutanées humaines vascularisées adaptées à une surveillance immunitaire longitudinale et à des prélèvements de biomarqueurs.
- Reproductibilité : Un protocole défini de préparation et de scellement du lit de greffe assure des taux de reprise constants entre les cohortes expérimentales.
- Extensibilité : Une taille standardisée de greffe de 10x10 mm permet le test parallèle de plusieurs conditions ou de candidats thérapeutiques.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pour les maladies : Modélise les interactions entre la peau et le système immunitaire humain, applicables à la cicatrisation des plaies, à la dermatologie auto-immune et à la maladie du greffon contre l'hôte.
- Continuité translationnelle : Établit un lien entre les études in vitro sur des explants cutanés humains et une validation in vivo avant les essais chez le primate ou chez l'humain.
- Réduction des risques mécanistiques : Permet une évaluation précoce des voies de rejet médiées par les neutrophiles ainsi que des stratégies thérapeutiques de blocage.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Le modèle s'inscrit dans le continuum de la découverte, allant de la validation de la cible jusqu'à l'évaluation préclinique de la sécurité, en particulier pour les produits biologiques modulant l'immunité innée ou l'intégration tissulaire.
- Découverte en biologie : Teste des hypothèses concernant l'infiltration des cellules immunitaires humaines et l'engraftement vasculaire dans des tissus xénogènes.
- Tri : Fournit des mesures quantitatives de l'engraftement (par exemple, survie de la greffe, vascularisation) pour des campagnes de criblage de composés.
- Analytique : Permet de mesurer l'infiltration des cellules immunitaires humaines et l'expression des cytokines comme paramètres pharmacodynamiques.
- Recherche translationnelle : Facilite l'identification de biomarqueurs de l'acceptation de la greffe, pertinents pour la surveillance clinique des transplantations.
- Réutilisation en entreprise : Met en place une plateforme de xénogreffe réutilisable pour des tests itératifs d'agents immunomodulateurs dans les portefeuilles de dermatologie et de transplantation.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Fournit un éclairage mécanistique sur l'acceptation humaine des greffes et réduit la dépendance aux modèles in vitro corrélés.
- Valeur opérationnelle : Une procédure de greffage standardisée améliore la reproductibilité entre laboratoires et le transfert technologique.
- Valeur stratégique : Éclaire les décisions de poursuite ou d'abandon en prédisant les résultats cliniques des greffes à partir de l'intégration préclinique des tissus humains.
- Impact sur le portefeuille : Permet une progression hiérarchisée selon le risque des immunomodulateurs en validant l'interaction avec la cible dans un contexte de tissu humain.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en chirurgie murine et en manipulation stérile des tissus pour assurer la viabilité de la greffe.
- Dépend de l'accès à des souches de souris immunodéficientes et à des tissus cutanés humains en épiderme fendu, dans le respect des exigences éthiques.
- Exige des protocoles standardisés d'immunosuppression (par exemple, blocage des récepteurs des neutrophiles) pour garantir des performances reproductibles du modèle.
- Requiert le maintien d'un champ stérile et une surveillance postopératoire afin d'éviter l'échec de la greffe dû à une infection ou à une dessiccation.
- Limité aux études d'engraftement aigu ; l'évaluation des résultats à long terme nécessite une validation supplémentaire pour la modélisation de maladies chroniques.
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Dernière mise à jour : 29 août 2026