Technique de génération d’un modèle de souris xénogreffe humanisée greffée de PBMC humain

Prenons l’exemple d’une souris immunodéprimée ne possédant que des neutrophiles et des monocytes comme cellules immunitaires fonctionnelles.

Injectez par voie intrapéritonéale du cyclophosphamide, un médicament qui cible les cellules progénitrices immunitaires.

Le médicament pénètre dans les cellules progénitrices immunitaires à prolifération active et réticule, provoquant la mort cellulaire. La mort des cellules progénitrices entraîne l’épuisement des cellules immunitaires.

Administrez par voie orale du disulfirame, un médicament qui forme un adduit avec le cyclophosphamide, réduisant ainsi les effets secondaires induits par le cyclophosphamide.

Injecter par voie sous-cutanée un mélange de cellules tumorales humaines et de cellules mononucléées du sang périphérique, ou PBMC, dans un mélange de protéines gélatineuses approprié.

Le mélange de protéines forme un gel, imitant la matrice extracellulaire physiologique, et piège les cellules tumorales.

La déplétion fonctionnelle des cellules immunitaires permet aux cellules tumorales de proliférer et de former de nouveaux vaisseaux sanguins, se transformant en une xénogreffe tumorale solide.

Simultanément, les lymphocytes T des PBMC injectés s’infiltrent dans la tumeur.

La xénogreffe tumorale présente des cellules T de croissance et d’infiltration tumorale, établissant un modèle murin de xénogreffe humanisé.

En cas de déplétion des cellules myéloïdes, administrer par voie intrapéritonéale 100 milligrammes par kilogramme de cyclophosphamide et administrer par voie orale 125 milligrammes par kilogramme de disulfirame à des souris femelles NOD/SCID âgées de 6 à 8 semaines une fois par jour pendant deux jours. 24 heures après la deuxième dose de cyclophosphamide et de disulfirame, remettre en suspension 5 x 10⁶ PBMC humain fraîchement isolé et 2,5 x 10⁶ cellules de lignée cellulaire tumorale humaine dans 200 microlitres de PBS plus 50 % de matrigel par animal, et injecter tout le volume par voie sous-cutanée dans le flanc droit de chaque animal de laboratoire. Mesurez et enregistrez le volume de la tumeur primaire 2 fois par semaine pendant 4 à 6 semaines.