JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 2:12 min • July 8th, 2025
Commencez avec une souris femelle anesthésiée en position couchée, portant des tumeurs urothéliales dans son épithélium de la vessie.
Fixez les pattes arrière, localisez l’ouverture urétrale et insérez un cathéter dans la vessie de la souris. Lavez la vessie pour éliminer l’urine.
Injectez la protéine activatrice des neutrophiles d’Helicobacter pylori, ou HP-NAP, une protéine bactérienne immunomodulatrice.
Dans le microenvironnement tumoral, HP-NAP interagit avec les récepteurs de type Toll sur les neutrophiles et initie une cascade de signalisation, augmentant l’expression des cytokines pro-inflammatoires.
Les cytokines déclenchent la différenciation des lymphocytes T naïfs en lymphocytes T auxiliaires de type 1, ou Th1, et en lymphocytes cytotoxiques de type 1, ou Tc1, qui produisent de l’interféron-gamma.
L’interféron-gamma inhibe la formation de nouveaux vaisseaux sanguins, limitant la disponibilité des nutriments et de l’oxygène pour la tumeur.
De plus, il régule à la hausse les molécules du CMH présentatrices d’antigènes tumoraux sur les cellules tumorales, facilitant ainsi l’interaction avec les cellules Tc1.
Cette interaction entraîne la libération de molécules cytotoxiques qui induisent la mort des cellules tumorales, démontrant ainsi l’efficacité antitumorale du HP-NAP.
Au moins trois jours après l’injection des cellules MB-49, après avoir anesthésié l’animal, cathétériser comme cela vient d’être démontré et à l’aide d’une seringue de 1 millilitre avec 200 à 300 microlitres de PBS stérile, laver l’urine résiduelle de la vessie, en aspirant tout le liquide.
Injectez 50 microgrammes de protéine activatrice des neutrophiles d’Helicobacter pylori ou HPNAP, pour 150 microlitres de PBS dans la vessie, en laissant la seringue attachée au cathéter pour éviter les fuites. Au bout d’une heure, retirez délicatement le cathéter de l’urètre et placez la souris dans une cage sous une lampe chauffante jusqu’à ce qu’elle se réveille.