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Immunologie
0 vues • 3:52 min • July 8th, 2025
Prenez les lymphocytes T régulateurs dérivés d’iPSC, ou Tregs, exprimant des récepteurs spécifiques de l’ovalbumine. Injectez-les dans la veine de la queue d’une souris retenue.
Les cellules atteignent la membrane synoviale qui tapisse la surface interne de la capsule articulaire du genou.
Ensuite, administrez de l’albumine sérique bovine méthylée ou mBSA, émulsionnée avec un adjuvant.
Les adjuvants améliorent la présentation de la mBSA aux cellules présentatrices d’antigènes, ou APC, qui traitent et présentent les fragments via les molécules du CMH.
Les APC migrent vers les ganglions lymphatiques, induisant l’activation des lymphocytes T. Les lymphocytes T activés migrent vers l’articulation du genou.
Injectez du mBSA seul et du mBSA avec de l’ovalbumine dans les articulations du genou gauche et droit, respectivement.
Dans le genou gauche, les APC présentent les fragments de mBSA aux lymphocytes T activés, déclenchant la libération de cytokines pro-inflammatoires et entraînant des lésions tissulaires et un gonflement des articulations, appelé arthrite.
Dans le genou droit, les Tregs interagissent avec les APC présentant de l’ovalbumine et libèrent des cytokines anti-inflammatoires, réduisant les lésions tissulaires et l’enflure des articulations, améliorant ainsi l’arthrite.
Commencez par détacher les cultures cellulaires d’intérêt avec de la trypsine et remettez en suspension chaque type de cellule dans 10 millilitres de milieu frais. Placez chaque culture cellulaire dans une nouvelle boîte de 10 centimètres et laissez les cellules nourricières adhérer dans l’incubateur de culture cellulaire. Après 30 minutes, collectez les iPSC flottantes et passez les cultures dans des passoires cellulaires individuelles de 70 microns pour retirer les grappes de cellules pour le comptage.
Remettre chaque culture en suspension à une concentration de 1,5 x 107 cellules par millilitre dans du PBS froid, en filtrant à nouveau si nécessaire. Ensuite, placez les souris femelles C57BL6 âgées de 4 à 6 semaines une à la fois dans un dispositif de contention pour petits animaux, et transférez adoptivement 200 microlitres d’un type de cellule par souris dans la veine de la queue de chaque animal.
Utilisez un pied à coulisse pour mesurer l’enflure des deux genoux afin d’établir la mesure de base. 10 jours après le transfert de cellules, utilisez une seringue de 1 millilitre pour injecter aux souris 100 microgrammes de BSA méthylé émulsionné dans un adjuvant de Freund complet à la base de la queue de chaque animal de laboratoire.
17 jours après le transfert cellulaire, induire l’arthrite par injection intra-articulaire de 20 microgrammes de BSA méthylé dans 10 microlitres de PBS dans l’articulation du genou gauche et de 20 microgrammes de BSA méthylée, et de 100 microgrammes d’ovalbumine entière dans 10 microlitres de PBS dans l’articulation du genou droit de chaque animal anesthésié transféré adoptivement.
Sept jours après avoir induit l’arthrite, mesurez à nouveau les genoux pour calculer le pourcentage d’augmentation du diamètre du genou et excisez chirurgicalement les rotules. Fixez les articulations dans du formol. Ensuite, après décalcification dans l’EDTA, encastrer les genoux dans de la paraffine, et obtenir des coupes de 4 microns pour la coloration histochimique et l’analyse.