Modification génétique des cellules CAR-T à l’aide d’un système CRISPR-Cas9

Commencez par une suspension de lymphocytes T et traitez-les avec des lentivirus CAR porteurs d’un gène pour le récepteur antigénique chimérique ou des lentivirus CAR et CRISPR.

Le lentivirus CRISPR contient des gènes pour l’ARN guide et la nucléase Cas9 ainsi qu’un gène de résistance aux antibiotiques.

Les lentivirus CAR et CRISPR interagissent avec les lymphocytes T et libèrent leur ARN.

Ces ARN sont retranscrits et convertis en ADN correspondant, qui s’intègre dans l’ADN des lymphocytes T.

Cela permet la synthèse des protéines CAR, des ARN guides et des protéines Cas9.

L’ARN guide forme un complexe avec Cas9, qui reconnaît et se lie spécifiquement au gène cible sur l’ADN des lymphocytes T.

Pendant ce temps, Cas9 clive l’ADN, créant une cassure double brin.

Cette cassure est réparée par l’assemblage d’extrémités non homologues, un mécanisme de réparation sujet aux erreurs, entraînant une modification du gène cible.

Cela génère des lymphocytes T génétiquement modifiés avec des récepteurs antigéniques chimériques.

Traitez les cellules avec des antibiotiques pour éliminer les cellules T non modifiées et isolez sélectivement les cellules CAR-T génétiquement modifiées.

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