Technique permettant de générer et d’administrer des aérosols de médicaments directement dans les poumons de souris

Commencez avec une unité d’inhalation par le nez seulement connectée à un générateur d’aérosol.

Connectez le générateur à une source d’air sous pression. Ensuite, connectez une seringue contenant une solution médicamenteuse thérapeutique, montée sur une pompe à perfusion réglée au débit souhaité.

Démarrez le flux d’air et le flux de médicament pour initier la génération d’aérosols.

Le flux d’air comprimé brise la solution médicamenteuse en minuscules gouttelettes, générant des aérosols médicamenteux de la taille d’un micron.

Les aérosols de médicament passent à travers le générateur dans l’unité d’inhalation connectée.

Maintenant, placez une souris consciente dans une contention de nez seulement, avec son nez orienté vers l’extrémité pointue du tube. Fixez le piston.

Lorsque la concentration d’aérosols dans l’unité d’inhalation atteint l’équilibre, insérez le dispositif de retenue transportant la souris dans l’unité d’inhalation.

Le dispositif de contention facilite l’exposition aux aérosols directement dans la cavité nasale murine.

La cavité nasale murine permet aux aérosols de passer à travers la trachée, ce qui permet leur administration directe vers les poumons.

Pour générer un aérosol liquide nébulisé, dissolvez le médicament d’intérêt dans 100 millilitres d’eau et chargez une seringue de 100 millilitres avec la solution médicamenteuse résultante.

Placez la seringue dans un pousse-seringue avec un débit réglé à 1 millilitre par minute et connectez la pompe au nébuliseur à jet.

Purger l’air de la conduite d’alimentation menant au nébuliseur et connecter la source d’air sous pression au nébuliseur à jet. Ensuite, réglez le débitmètre d’air à 10 litres par minute avec le nébuliseur à jet installé dans le pré-séparateur, qui relie le nébuliseur au plénum central des aérosols de l’unité d’inhalation.

Tout d’abord, transférez un filtre pré-pesé dans le porte-filtre et assemblez le support.

Connectez l’entrée du porte-filtre absolu à un orifice central de plénum d’aérosol dans la sortie d’une source de vide.

Ensuite, assemblez l’impacteur en cascade pour recueillir l’aérosol en plaçant des filtres pré-pesés sur chacun des sept étages de l’impacteur en cascade, puis assemblez l’impacteur en cascade Mercer.

L’assemblage correct de l’impacteur en cascade est essentiel. Les étages doivent être chargés dans l’ordre et l’orientation corrects, avec l’étage le plus grand le plus proche de l’entrée.

Connectez l’entrée de l’impacteur en cascade à un orifice central d’échantillonnage de plénum d’aérosol dans la sortie d’une source de vide.

Pour surveiller la teneur en aérosols de l’unité d’inhalation, connectez l’entrée du moniteur d’aérosols en temps réel à un orifice central d’échantillonnage de plénum d’aérosols dans la sortie d’une source de vide.

Réglez les paramètres de contrôle du procédé sur les valeurs appropriées en fonction du nombre d’animaux à connecter à l’unité d’inhalation et commencez l’administration du médicament aérosolisé d’intérêt. Bouchez les orifices de refoulement de l’unité d’inhalation avec des bouchons et activez le générateur d’aérosol, le régulateur de débit d’air comprimé et la pompe à vide de l’unité d’inhalation depuis le logiciel de contrôle du processus.

Maintenant, chargez les souris expérimentales dans les dispositifs de retenue du nez uniquement, en inclinant les tubes de retenue vers le plafond car les animaux ont tendance à courir vers le haut pendant le processus de chargement avec le nez aux extrémités pointues des tubes.

Fixez les pistons à position variable aux extrémités arrière des dispositifs de retenue afin que les animaux puissent pivoter mais ne pas tourner de la tête à la queue.

Le chargement des souris dans les tubes de contention demande de la patience et de la coordination. Veuillez manipuler les animaux avec douceur.

Lorsque les lectures du moniteur d’aérosols en temps réel démontrent que la concentration d’aérosols a atteint l’équilibre, commencez à retirer les bouchons et à insérer les tubes de retenue du nez seulement dans l’unité d’inhalation.

Lorsque tous les animaux de laboratoire sont connectés à l’unité d’exposition, mettez en marche les pompes d’échantillonnage à vide connectées au filtre absolu dans l’impacteur en cascade.

Administrer le médicament aux animaux pendant les périodes appropriées.

Lorsque toutes les expositions sont terminées, éteignez le générateur d’aérosol et retirez les souris de l’unité d’inhalation.