Une technique d’édition génomique dans des cellules tueuses naturelles à l’aide de CRISPR Cas9

Prenez un mélange d’un ARN CRISPR, ou ARNcr, et d’un ARNcr ou ARNcr trans-activateur.

Chauffez le mélange et laissez-le refroidir, facilitant ainsi l’appariement de la base de l’ARNtracr avec l’ARNcr pour former un ARN guide, ou ARNg.

Ajoutez des ciseaux moléculaires appelés enzymes Cas9 qui se lient à l’ARNg, créant ainsi des complexes.

Ajoutez les complexes Cas9-gRNA à des cellules Natural Killer ou NK en suspension dans une solution d’électroporation.

Introduire des molécules d’ADN simple brin qui aident au transport des complexes Cas9-gRNA.

Transférez le mélange dans une cuvette et effectuez une électroporation, créant des pores temporaires dans la membrane pour que les complexes pénètrent dans la cellule.

L’ARNg se lie au site cible du génome, ce qui permet à Cas9 de cliver l’ADN.

Les protéines de réparation se lient au site de la rupture et rejoignent l’ADN, provoquant souvent des erreurs d’insertion ou de suppression de paires de bases. La modification qui en résulte perturbe le gène cible, le rendant non fonctionnel.

Transférez les cellules génétiquement modifiées dans un milieu approprié pour une analyse plus approfondie.

Le jour de l’électroporation, remplissez un flacon