Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 2:58 min • July 8th, 2025
Commencer avec des plasmides bidirectionnels portant de l’ADNc codant pour certaines protéines essentielles virales d’une souche de grippe adaptée au froid.
Introduire un nouvel ensemble de plasmides bidirectionnels contenant de l’hémagglutinine et de l’ADNc neuraminidase modifié d’une souche de grippe différente.
Introduisez un réactif de transfection dans ce mélange et incubez pour former un complexe avec les plasmides.
Transférez ces complexes sur des cellules épithéliales humaines en culture pour permettre l’entrée du plasmide dans la cellule.
Les plasmides bidirectionnels avec deux promoteurs dans des orientations opposées permettent la production de protéines virales et de leur ARN correspondant.
Incuber les cellules à une température plus basse.
Les protéines virales et les ARN viraux s’auto-assemblent pour former des virus grippaux recombinants adaptés au froid avec une réplication réduite dans des conditions plus chaudes.
Superposition avec des cellules MDCK surexprimant l’acide sialique et des enzymes trypsine modifiées qui permettent la fixation et l’entrée virales à l’intérieur des cellules.
Incuber à la même température pour induire la réplication et la production de n
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