Évaluation des effets de la transplantation de microbiote fécal chez une souris déficiente en interleukine-10

Commencez avec une souris immobilisée dépourvue d’interleukine-10, une cytokine anti-inflammatoire, qui entraîne une inflammation du côlon.

Prenez une seringue remplie d’une suspension fécale riche en divers microbes intestinaux, provenant d’une souris en bonne santé.

Ensuite, fixez un tube oral à la seringue.

Insérez ce tube dans la bouche, en le guidant vers le bas jusqu’à l’estomac de la souris.

Maintenant, administrez la suspension fécale directement dans l’estomac, ce qui lui permet d’atteindre progressivement le côlon.

Une fois dans le côlon, les microbes fécaux se multiplient et colonisent, rétablissant les microbes intestinaux.

Les microbes colonisés libèrent ensuite divers métabolites secondaires.

Ces métabolites aident à la production de mucine, ce qui répare l’épithélium du côlon et restaure l’intégrité de l’intestin.

Dans l’épithélium du côlon, les microbes fécaux et leurs métabolites interagissent avec les cellules immunitaires.

Cette interaction amène les cellules immunitaires à libérer des cytokines anti-inflammatoires, ce qui entraîne une réduction de l’inflammation du côlon chez la souris déficiente en interleukine-10.

Préparez une solution stérile en ajoutant une solution de glycérol à 10 % à une solution saline normale. Ajoutez 10 millilitres de cette solution dans le tube conique pour chaque gramme de boulettes fécales. Homogénéisez ce mélange à basse vitesse trois fois pendant 30 secondes, à l’aide d’un homogénéisateur de paillasse à l’intérieur d’une hotte pour remettre les matières fécales en suspension. Filtrez la suspension fécale à travers deux couches de gaze de coton stérile. Conservez temporairement le filtrat dans un réfrigérateur jusqu’à six heures, ou emballez-le dans des flacons cryogéniques stériles et conservez-le dans un congélateur à moins 80 degrés.

Nettoyez soigneusement l’homogénéisateur ou le mélangeur en suivant une procédure standard. Décongeler la suspension fécale congelée sur de la glace si vous utilisez des échantillons congelés. Mélangez la suspension fécale décongelée par vortex. Transférez la suspension fécale fraîche ou décongelée dans des seringues de 1 millilitre. Pesez les souris et choisissez la bonne taille d’aiguille de gavage et le volume de dosage maximal.

Testez l’aiguille du gavage en mesurant la longueur de la pointe du nez de la souris jusqu’au bas du sternum. Remplissez la seringue avec 10 % de glycérol en suspension saline ou fécale, et éliminez les bulles d’air à l’intérieur de la seringue et de l’aiguille. Placez une cage à souris dans l’enceinte de biosécurité, retirez le couvercle de la cage en plastique et laissez le support métallique en place.

Ouvrez le support métallique d’une seule main. Attrapez une souris par la queue et placez-la sur le support métallique. Tenez la souris par la queue d’une main et utilisez le pouce et le majeur de l’autre main pour retenir l’animal en saisissant la peau par-dessus les épaules. Étendez doucement la tête de l’animal vers l’arrière et maintenez la tête en place d’une main. Placez l’aiguille de gavage sur le dessus de la langue à l’intérieur de la bouche.

Avancez doucement le long du palais supérieur jusqu’à ce que l’aiguille atteigne l’œsophage. Passez l’aiguille en douceur en un seul mouvement. Une fois que l’aiguille est correctement placée et vérifiée, administrez lentement le matériau en poussant la seringue attachée à l’aiguille. Après le dosage, retirez doucement l’aiguille. Marquez la souris et remettez-la dans sa cage d’origine. Surveillez l’animal pendant 5 à 10 minutes à la recherche de signes de respiration laborieuse ou de détresse. Surveillez à nouveau les souris entre 12 et 24 heures après la greffe de microbiote fécal.