Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Prenez une plaque multipuits contenant des sphéroïdes du cancer colorectal dans un milieu de croissance.
Les sphéroïdes sont des agrégats tridimensionnels de cellules cancéreuses qui ressemblent au microenvironnement tumoral physiologique.
Retirez le milieu de croissance et ajoutez des concentrations croissantes de Lactobacillus cell-free surnageant, ou LCFS, le surnageant de culture obtenu à partir d’une culture de Lactobacillus, une bactérie du tube digestif.
Le LCFS est dépourvu de cellules bactériennes mais contient des métabolites actifs avec une activité anticancéreuse sécrétée par la bactérie.
Les métabolites bactériens du LCFS interagissent avec les cellules cancéreuses du sphéroïde, induisant l’apoptose et conduisant à la mort cellulaire.
Les dommages aux cellules entraînent une perturbation de la morphologie des sphéroïdes.
À l’aide d’un microscope, examinez les sphéroïdes traités au LCFS pour observer une augmentation de la mort cellulaire avec l’augmentation de la concentration de LCFS, indiquant l’activité anticancéreuse dose-dépendante des métabolites bactériens.
Pour le traitement LCFS, diluez en série la solution mère LCFS préparée et décongelée dans un milieu de croissance frais à des concentrations de 25 %, 12,5 et 6 % et utilisez une pipette de 200 microlitres pour retirer soigneusement autant de surnageant que possible de chaque puits des cultures de lignées cellulaires de cancer colorectal en plaques.
Ensuite, ajoutez doucement 200 microlitres de milieu de croissance complété en LCFS en trois exemplaires à chaque ensemble de cellules cancéreuses, et remettez la plaque dans l’incubateur pendant 24 à 48 heures supplémentaires.