Technique de génération de cellules CAR-T spécifiques de l’antigène
Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 3:32 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque de micropuits recouverte de fragments de fibronectine recombinante et ajoutez-y des lymphocytes T CD8 positifs murins activés.
Introduire des vecteurs rétroviraux contenant un ARN transgénique qui code pour un récepteur antigénique chimérique ou CAR.
Couvrez l’assiette et scellez-la dans un sac pour éviter toute contamination. Centrifuger la plaque à basse vitesse pour faciliter l’interaction virus-cellule.
La fibronectine se lie au virus et à la cellule, les colocalisant pour améliorer le transfert de gènes médié par le virus.
Après la centrifugation, retirer le sac scellé et incuber la plaque dans des conditions physiologiques.
L’enveloppe du vecteur viral fusionne avec la membrane cellulaire, libérant l’ARN viral et les enzymes.
Les enzymes virales inversent la transcription de l’ARN libéré et intègrent l’ADN résultant dans le génome de l’hôte, permettant aux cellules d’exprimer des CAR liés à la surface.
Le CAR comprend un domaine de liaison à l’antigène spécifique à l’antigène cible et des domaines de signalisation pour l’activation des lymphocytes T.
Les cellules CAR-T spécifiques de l’antigène sont prêtes pour les tests en aval.
Le jour 1, préparez des plaq
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