JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 4:31 min • July 8th, 2025
Placez un rat receveur anesthésié avec un membre postérieur rasé sur un tampon chaud sous un microscope à dissection.
Inciser la peau et disséquer le fascia, exposant le complexe du tendon d’Achille.
Retirez le tendon plantaire et excisez un petit segment du tendon d’Achille, créant ainsi une lésion.
Suturez l’incision et laissez le rat récupérer.
Prélever du sang total d’un rat donneur génétiquement différent, mélangé à un anticoagulant.
Centrifugeuse pour obtenir une phase inférieure des globules rouges et une phase supérieure du plasma riche en plaquettes, ou PRP.
Transférez le PRP dans un tube et faites tourner les plaquettes. Retirer partiellement le surnageant et remettre les plaquettes en suspension pour obtenir un PRP concentré.
Ajoutez du chlorure de calcium et incubez pour induire l’activation plaquettaire. Ensuite, injectez les plaquettes activées dans le site suturé du receveur.
Les plaquettes activées libèrent des cytokines et des facteurs de croissance spécifiques qui induisent la réparation des tendons au site de la lésion.
Commencez par peser et marquer l’oreille du rat. Après avoir confirmé le niveau approprié de sédation par pincement des orteils, appliquez des gouttes d’eau sur les cornées de l’animal et retirez les poils du membre postérieur gauche. Désinfectez la peau exposée avec une dilution de 1 à 10 de la solution d’iso-bétadine et placez l’animal sur un coussin chauffant à 20 degrés Celsius, sous un microscope à dissection.
En position de prélèvement latéral avec le membre postérieur gauche en position supérieure, saisissez la patte du membre postérieur gauche avec une pince et faites une incision cutanée latérale de 20 à 25 millimètres autour du tendon d’Achille, à l’aide de ciseaux fins. Disséquez le fascia pour exposer le complexe du tendon d’Achille et retirez le tendon plantaire.
Coupez le tendon d’Achille transversalement à 5 millimètres de son insertion calcanéenne et retirez une portion de 5 millimètres de long. Ensuite, utilisez du fil résorbable en sutures continues pour fermer le fascia et la peau, et placez le rat sous une source de chaleur avec surveillance jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement. Pendant que les animaux receveurs se rétablissent, prélevez 20 millilitres de sang total d’un cœur de rat donneur, par animal de laboratoire, dans des tubes individuels contenant 3,2 % de citrate de sodium tamponné.
Pour obtenir le plasma riche en plaquettes, centrifugez le sang et utilisez une pipette de transfert en plastique pour prélever soigneusement la phase supérieure contenant du PRP dans un deuxième tube en plastique. Déterminez le volume de PRP recueilli et mesurez la numération plaquettaire à l’aide d’un analyseur d’hématologie.
Centrifugez à nouveau le PRP et transférez soigneusement le surnageant dans un nouveau tube en plastique. Le volume restant dans le tube PRP doit être d’environ 2/3 du volume nécessaire pour obtenir 2,5 x 106 plaquettes par microlitre. Ensuite, remettez doucement en suspension la pastille de plaquettes avec un pipetage. Mesurez le nombre de plaquettes de ce plasma concentré riche en plaquettes, en ajoutant le volume approprié de plasma autologue pauvre en plaquettes pour atteindre la concentration cible si nécessaire.
Activez les plaquettes avec 50 microlitres de chlorure de calcium par millilitre de PRP pendant environ 1 heure à température ambiante. Ensuite, chargez les plaquettes dans une seringue de 1 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 21 et injectez 50 microlitres de plaquettes directement dans le site de suture de chaque animal.