Formulation de nanoparticules chargées d’ARNm à des fins de vaccination

Commencez avec une solution de polymère congelée contenant des polymères chargés positivement.

Décongeler la solution polymère jusqu’à ce qu’elle atteigne la température ambiante.

Ajouter un tampon et un vortex pour un mélange uniforme, générant une solution homogène.

Introduire l’ARNm cible dans la solution polymère dans un rapport égal pour une réaction optimale.

Incuber pour permettre aux polymères chargés positivement d’interagir avec les groupes phosphate chargés négativement dans l’ARNm via des interactions électrostatiques.

Cela facilite l’incorporation de l’ARNm dans la structure du polymère, formant des nanoparticules de complexes ARNm-polymères ou de polyplexes.

Transférez ces polyplexes dans un tube contenant de l’eau sans RNase.

Mélangez-les et laissez la précipitation des polyplexes.

Introduisez un tampon contenant du saccharose et congelez-le. Le saccharose agit comme un cryoprotecteur qui maintient l’intégrité structurelle des polyplexes.

Ensuite, effectuez une lyophilisation, pour éliminer toute trace d’eau.

Conservez-le à basse température en tant que candidat vaccin à ARNm pour une utilisation future.

Pour la formation de polyplexes, décongelez les polymères précédemment préparés C-6 peptide poly-bêta amino esters et vortex la solution. Après avoir pipeté le mélange de polymères de haut en bas, préparez une solution de 12,5 millimolaires dans de l’acétate de sodium. Vortex la solution et attendez 10 minutes.

Ensuite, préparez l’ARNm à 0,5 milligramme par millilitre et mélangez par pipetage. Vortex à nouveau la solution polymère. Ensuite, mélangez la solution de matériel génétique dans la solution de polymère dans un rapport de un pour un dans un tube de microcentrifugation, et incubez le tube à 25 degrés Celsius pendant 30 minutes dans un bloc thermique. Après l’incubation, précipitez le mélange avec une à deux eaux exemptes de RNase en ajoutant l’échantillon dans un tube de microcentrifugation contenant l’eau.

Ensuite, pour inclure les excipients, ajoutez une solution de HEPES de 20 millimolaires et de saccharose à 4 % dans le même volume que le mélange d’ARNm et d’esters aminés poly-bêta et mélangez par pipetage. Pour la lyophilisation, après avoir congelé la solution de polyplexe à moins 80 degrés Celsius pendant une heure, effectuez le séchage primaire, puis stockez immédiatement les polyplexes à moins 20 degrés Celsius pour éviter la réhydratation.