Construire un modèle de souris humanisé avec une immunité artificielle contre le VIH

Préparez une souris receveuse anesthésiée sévèrement immunodéprimée.

Faites une incision pour exposer le rein et créez un trou dans la capsule rénale.

Prenez une aiguille d’implant contenant du tissu de thymus fœtal humain et des cellules hépatiques fœtales en suspension dans un mélange de protéines gélatineuses.

Les cellules comprennent des cellules souches hématopoïétiques modifiées, ou CSH, exprimant des récepteurs antigéniques chimériques, ou CAR, ciblant le VIH.

Implantez la suspension cellulaire et le tissu thymique sous la capsule, puis fermez l’incision.

Ensuite, injectez rétro-orbitalement les CSH exprimant CAR-Al et permettez à la souris de récupérer.

Dans le rein, le mélange de protéines gélatineuses polymérise en une matrice, retenant les CSH au site d’implantation.

Les CSH matricielles migrent vers le thymus, se différenciant en lymphocytes T humains fonctionnels.

Pendant ce temps, les CSH injectées rétro-orbitales atteignent la moelle osseuse et se différencient en cellules B humaines fonctionnelles, en monocytes et en cellules NK.

Le modèle murin avec un système immunitaire humain contre le VIH est maintenant prêt.

Versez les morceaux de thymus et le milieu de la fiole dans un plat de 60 millimètres. Refroidissez certaines pointes de pipette à déplacement positif en les plaçant dans des tubes à vis stériles ouverts de 1,5 millilitre sur de la glace. Placez également les granules cellulaires et un volume de mélange de protéines gélatineuses, tel que Matrigel, sur de la glace.

Anesthésie les souris receveuses avec un anesthésique injectable selon un protocole animal approuvé. Vérifiez le niveau d’anesthésie de la souris en serrant une patte. L’absence de réaction au pincement indique un plan chirurgical de l’anesthésie.

Rasez le côté gauche de chaque souris de la hanche à l’épaule, entre le centre du dos et le ventre. Par voie sous-cutanée, injectez 6 milligrammes par kilogramme de carprofène dilué dans l’épaule ou le triangle inguinal de l’animal. Rincer la canule du trocart avec du PBS dans une parabole de 60 millimètres. À l’aide d’une paire de pinces émoussées et incurvées, placez un morceau de thymus de la boîte de 60 millimètres juste à l’intérieur de l’ouverture de la canule, puis tirez sur le trocart pour aspirer le tissu dans la canule.

Ensuite, à l’aide d’une pipette à déplacement positif et d’un embout réfrigéré, ajoutez 5 microlitres de mélange de protéines gélatineuses froides dans le tube contenant la pastille de cellule, et remuez doucement pour générer la suspension cellulaire. Pipetez la suspension cellulaire dans l’ouverture de la canule et tirez lentement sur le trocart pour charger l’aiguille.

Tamponnez la zone rasée de la souris avec de la povidone iodée suivie de l’isopropanol trois fois. Déterminez la tache la plus foncée sous la peau, ce qui indique l’emplacement de la rate. Le rein est d’environ 5 millimètres dorsal par rapport à la rate.

Après avoir assuré un niveau d’anesthésie approprié par l’absence de réaction au pincement de la patte, utilisez des pinces incurvées pour soulever la peau et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une incision de 15 millimètres dans la peau parallèlement à la rate. Ensuite, faites une coupe similaire dans la couche de péritoine ci-dessous.

Chez les mâles, le rein est facilement visible, donc extrudé simplement en appuyant sur l’abdomen. Soutenez le rein à l’aide d’un hémostatique ou d’une paire de pinces émoussées incurvées. Chez les femelles, les ovaires ont tendance à bloquer le rein pour faciliter l’extraction. À l’aide d’un hémostat, prélevez l’ovaire et exposez soigneusement le rein.

À l’aide d’une pince à pointe d’aiguille, percez un petit trou à l’extrémité postérieure de la capsule rénale. Faites glisser le trocart dans ce trou et le long du rein jusqu’à ce que l’ouverture de la canule soit complètement recouverte par la capsule rénale. Extrudez doucement le tissu sous la capsule rénale et tirez le trocart vers l’extérieur. Utilisez une pince incurvée pour vous assurer que le morceau de thymus ne sort pas avec l’aiguille.

Ensuite, soulevez le péritoine à l’aide de la pince et utilisez doucement l’hémostat pour remettre le rein en place. Faites un point de suture à double nœud avec une suture chirurgicale dans le péritoine. Placez également deux clips automatiques pour fermer la peau.

Maintenant, mélangez les cellules CD34 positives transduites et aspirez 0,5 x 10⁶ cellules d’un volume de 100 microlitres dans une seringue à insuline. Injectez ces cellules dans la souris par injection veineuse rétro-orbitale.

Après l’injection, appliquez une petite goutte de lubrifiant pour les yeux sur chaque œil et allongez la souris sur le côté dans une cage. Après avoir implanté toutes les souris, confirmez que les animaux ont repris conscience et qu’ils sont ambulatoires avant de les ramener dans la pièce d’hébergement.