Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:21 min • July 8th, 2025
Prenons l’exemple d’un mélanome murin composé de neutrophiles associés à la tumeur, ou TAN.
Les TAN présentent une activité élevée de l’enzyme nicotinamide phosphoribosyltransférase, ou NAMPT, stimulant l’angiogenèse, la prolifération des vaisseaux sanguins dans les tumeurs et facilitant la croissance tumorale.
Hachez le tissu et ajoutez des enzymes pour dégrader la matrice tissulaire, détachant ainsi les cellules.
Filtrez la suspension à travers une crépine et une centrifugeuse pour granuler les cellules.
Ajoutez un tampon de lyse pour lyser les globules rouges, puis centrifugez et jetez le surnageant contenant des débris cellulaires.
Introduire des anticorps pour bloquer les récepteurs cellulaires Fc, évitant ainsi l’immunocoloration non spécifique.
Introduire un cocktail d’anticorps marqués au fluorophore spécifique pour les marqueurs de surface sur les TAN et un colorant pour discriminer les cellules mortes.
À l’aide du FACS, isolez les TAN viables marqués au fluorophore et transférez-les sur une microplaque.
Ajoutez un inhibiteur bloquant l’activité de NAMPT aux puits sélectionnés et incuberez.
Utilisez les cellules pour évaluer leur capacité de stimulation de l’angiogenèse. L
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