JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 vues • 2:25 min • July 8th, 2025
Prenez une lame à chambre multipuits contenant des monocouches de microglie.
Dans le puits d’essai, enduisez les cellules de β-glucane. Le puits de contrôle manque β-glucane. Couver.
Dans le puits de test, les β-glucanes, des motifs moléculaires associés à des agents pathogènes, se lient à des récepteurs spécifiques de la microglie, provoquant une phagocytose β-glucane.
Cela active la microglie, produisant et libérant des molécules bioactives telles que des oxydants réactifs et des cytokines dans le milieu.
Récupérez les médias contenant des molécules bioactives dans les puits et filtrez-les pour éliminer les débris et le β-glucane.
Congeler le média à basse température pour préserver l’activité biologique des molécules bioactives.
Ensuite, décongelez et ajoutez le milieu à une lame à chambre multipuits contenant des monocouches de cellules cancéreuses du cerveau. Couver.
Les molécules bioactives déclenchent les voies de signalisation cellulaire, réduisant la prolifération des cellules cancéreuses et induisant l’apoptose.
La réduction de la prolifération des cellules cancéreuses et l’augmentation de l’apoptose suggèrent que les β-glucanes sont des agents favorisant les propriétés antitumorales de la microglie contre les cellules cancéreuses du cerveau.
Activez la microglie en enrobant les cellules microgliales BV-2 pendant 72 heures avec une concentration de 0,2 milligramme par millilitre de quatre bêta-glucanes différents isolés de P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum et H. erinaceus. Après 72 heures, prélevez le surnageant à l’aide d’une pipette et passez le volume restant à travers un filtre à seringue de 0,20 micromètre. Ensuite, congelez le surnageant à -80 degrés Celsius pendant au moins 24 heures. Pour traiter le GL261 avec le milieu conditionné par la microglie pré-activé, ajoutez 250 microlitres de milieu microglial traité au bêta-glucane à 80 % de cellules GL261 confluentes pendant 72 heures.