Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:51 min • July 8th, 2025
Prenez le cerveau d’un bébé souris transgénique.
Retirez le cervelet et disséquez le cerveau. Séparez le tissu cortico-hippocampique contenant les neurones excitateurs exprimant des protéines fluorescentes.
Transférez le tissu dans une plaque de culture contenant un tampon.
Émincez le tissu et transférez-le dans un tube contenant de la papaïne.
La papaïne digère la matrice extracellulaire du tissu, relâchant les cellules, y compris les neurones.
Transférez le tissu digéré dans un tube contenant des protéines BSA, arrêtant ainsi l’activité enzymatique et prévenant les dommages cellulaires.
Dissocier mécaniquement les tissus, libérant des cellules.
Centrifugez et retirez le surnageant contenant les débris et les enzymes.
Remettez les cellules en suspension dans un milieu neuronal à faible fluorescence et filtrez-les à travers une passoire cellulaire, en éliminant les agrégats cellulaires.
Effectuez un tri cellulaire activé par fluorescence pour identifier et trier les neurones fluorescents.
Transférez les neurones triés dans un tube de microcentrifugation et centrifugez. Réactiver les neurones dans les milieux neuronaux.
Neurones-graines sur des lamelles enrobées de poly-L-lysine dan
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