Génération de progéniteurs neuraux à partir de cellules souches embryonnaires dans des cultures monocouches sans sérum

Commencez par une culture de cellules souches embryonnaires de souris.

Lavez les cellules avec un tampon pour éliminer les fluides et les débris cellulaires.

Ajouter un cocktail d’enzymes pour détacher les cellules de la surface du ballon.

Ajoutez un milieu pour arrêter l’activité enzymatique et rassemblez les cellules dans un tube. Centrifuger et jeter le surnageant contenant des enzymes.

Remettre les cellules en suspension dans des milieux de culture neuronale sans sérum.

Ensemencez les cellules dans des puits à plaques multipuits recouverts de gélatine.

couver. Les cellules souches embryonnaires adhèrent à la surface recouverte de gélatine. Les constituants du milieu, y compris les nutriments, les facteurs de croissance et les hormones, facilitent la prolifération cellulaire et forment une monocouche.

À cette densité cellulaire, les cellules souches embryonnaires produisent et libèrent des niveaux optimaux de facteurs de croissance et de cytokines.

Ces molécules déclenchent des voies de signalisation intracellulaires, facilitant la différenciation des cellules souches embryonnaires en progéniteurs neuraux.

Mélangez la gélatine avec 500 millilitres de PBS chaud et couvrez le fond