Technique de co-culture pour différencier des cellules progénitrices neurales humaines en neurones

Prenez une culture de cellules progénitrices neurales humaines, ou NPC, soutenues par une matrice extracellulaire.

Les NPC sont conçus pour exprimer une protéine fluorescente.

Jetez le milieu et lavez les cellules pour éliminer tout milieu résiduel.

Incuber la culture avec des enzymes qui perturbent la matrice, dissociant les cellules.

Transférez les cellules détachées dans un tube et ajoutez un milieu pour neutraliser l’action enzymatique.

Centrifuger pour granuler les cellules, éliminer le surnageant et remettre en suspension les NPC dans un milieu de différenciation neuronale.

Transférez les NPC sur une co-culture établie d’astrocytes de souris et de neurones corticaux de rat.

Les facteurs de croissance libérés par la co-culture établie, ainsi que les contacts cellule-cellule des NPC avec les neurones corticaux et les astrocytes, favorisent la différenciation des NPC en neurones matures.

Les neurones matures présentent des processus cellulaires étendus et forment des connexions synaptiques.

Sous un microscope confocal, utilisez le signal des protéines fluorescentes pour visualiser les neurones humains dérivés de NPC.

Après avoir généré des cellules souches pluripotentes induites