Une méthode in vitro pour générer des organoïdes cérébraux humains

Commençons par une culture de neurosphères, des amas flottant librement de cellules progénitrices neuroépithéliales.

Transférez ces neurosphères sur une feuille d’encastrement.

Retirez le support. Ajoutez une goutte de matrice membranaire extracellulaire contenant des protéines et des facteurs de croissance à chaque neurosphère.

Incuber pour que la matrice se solidifie, en intégrant les neurosphères en son sein.

Maintenant, transférez les neurosphères intégrées dans la matrice à l’aide de milieux neurosphériques vers une plaque de culture contenant des milieux neurosphériques.

couver. La matrice membranaire extracellulaire et ses constituants facilitent la différenciation des cellules progénitrices neuroépithéliales en cellules neuroépithéliales qui prolifèrent et forment des lumières remplies de liquide.

Après l’incubation, transférez les neurosphères dans une fiole tournante contenant des organoïdes cérébraux préchauffés. Incuber avec agitation pour une meilleure diffusion de l’oxygène et des nutriments, favorisant la croissance cellulaire.

Les facteurs de croissance et les inhibiteurs de petites molécules dans les milieux favorisent la différenciation neuronale et se développent