Développement d’une coculture de neurones et de macrophages in vitro

Commencez avec des neurones ganglionnaires de la racine dorsale murine isolés dans un milieu de croissance.

Plantez-les sur une plaque multi-puits recouverte de polymère pour favoriser l’attachement neuronal.

Ensuite, prenez une souris euthanasiée disséquée et injectez du PBS glacé dans sa cavité péritonéale.

Massez doucement le péritoine pour déloger les macrophages de la paroi du péritoine.

Pressez la souris pour recueillir le liquide péritonéal et traitez-le avec un tampon de lyse pour lyser sélectivement les globules rouges, qui apparaissent comme des contaminants. Centrifugez et mettez les cellules en suspension dans un milieu de culture.

Transférez les macrophages dans un insert poreux positionné à l’intérieur du puits contenant les neurones en culture.

Cette co-culture permet aux neurones et aux macrophages d’être à proximité.

Traiter la co-culture avec db-cAMP et incuber pour faciliter son entrée dans les cellules. Cela active les neurones pour sécréter les molécules de signalisation.

Ces molécules de signalisation, ainsi que l’AMPdb-c, incitent les macrophages à adopter un phénotype pro-régénérateur et à sécréter des facteurs essentiels à la croissance neuronale.

Avant de