Utilisation d’un milieu conditionné par des macrophages pour favoriser l’extension des neurones

Commencez par l’adénosine monophosphate cyclique, ou AMPc, une molécule de signalisation qui régule diverses fonctions cellulaires. Ajouter l’AMPc à une co-culture neurone-macrophage.

Les molécules d’AMPc du milieu et les facteurs de croissance des neurones déclenchent l’activation des macrophages.

Transférez l’insert contenant les macrophages activés dans un autre puits contenant un milieu de culture de macrophages.

Ici, les macrophages libèrent des cytokines et des chimiokines dans le milieu, formant un milieu conditionné ou CM.

Centrifugez le CM pour granuler les composants cellulaires.

Transférez le surnageant et le filtre pour éliminer les débris cellulaires.

Ajoutez le CM collecté à une culture neuronale. Les cytokines et les chimiokines contenues dans le CM collecté favorisent l’extension des neurones.

Ajouter du paraformaldéhyde réfrigéré pour fixer les cellules.

Ajoutez un tampon de blocage pour éviter la liaison non spécifique des anticorps. Laver pour enlever le tampon résiduel.

Appliquez des anticorps primaires qui ciblent les protéines cytosquelettiques des neurones. Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Ajoutez des anticorps secondaires conjugués au fluorophore