Préparation de tranches de cerveau en coin pour visualiser les neurones auditifs

Commencez avec un cerveau de souris et disséquez-le horizontalement sous la partie postérieure pour préserver les neurones auditifs cruciaux pour le traitement du son.

Montez la section postérieure sur un disque magnétique. Placez un bloc de gélose pour stabiliser le tissu pendant le tranchage.

Transférez la section à l’étage d’une chambre de tranchage d’un vibratome équipé d’une lame.

Introduire un tampon froid et un gaz carbogen à bulles qui fournit de l’oxygène et préserve l’intégrité des neurones.

Faites une coupe horizontale uniforme pour enlever la partie supérieure de la section du cerveau.

Ensuite, inclinez la platine et continuez à couper la section restante jusqu’à ce que la racine nerveuse auditive soit visible.

Réalignez la scène. Ensuite, tournez-le et ajustez la position de la lame pour l’épaisseur souhaitée du bord fin de la tranche.

Éloignez la lame et réalignez la platine dans sa position précédente. Maintenant, coupez le cerveau en forme de coin, plus épais d’un côté et plus mince de l’autre.

Le côté le plus épais comprend la racine nerveuse auditive, tandis que le côté le plus mince présente des neurones auditifs interconnectés.

Commencez par utiliser une lame de rasoir pour couper la peau sur la ligne médiane du crâne, du nez à l’arrière du cou. Pelez la peau pour exposer le crâne et, en commençant à la base du crâne et en continuant vers le nez, utilisez de petits ciseaux pour faire une incision dans le crâne à travers la ligne médiane.

Au niveau de la suture lambda, faites des incisions dans le crâne de la ligne médiane latéralement vers l’oreille des deux côtés pour décoller le crâne afin d’exposer le cerveau. En commençant par l’extrémité rostrale, utilisez une petite spatule de laboratoire pour soulever doucement le cerveau du crâne afin de permettre aux nerfs optiques d’être sectionnés.

Continuez à travailler doucement le cerveau vers l’arrière, en exposant la surface ventrale, et utilisez des pinces fines pour pincer soigneusement les nerfs trijumeaux près de la surface ventrale du tronc cérébral pour les couper. Placez la préparation dans une boîte de Pétri en verre remplie d’une solution de tranchage froide, et placez la boîte sous un microscope à dissection. Coupez les nerfs faciaux près du tronc cérébral pour exposer les nerfs vestibulocochléaires.

À l’aide d’une pince fine, enfoncez les pointes dans les foramens où le nerf vestibulocochléaire sort du crâne le plus loin possible. Pincez pour sectionner les nerfs des deux côtés, en laissant la racine nerveuse attachée au tronc cérébral.

Retirez les méninges et le système vasculaire de la surface ventrale du tronc cérébral près du corps trapézoïdal. Ensuite, pincez les nerfs crâniens et le tissu conjonctif restants pour libérer complètement le cerveau du crâne, en prenant soin de préserver la moelle épinière restante, si possible.

Pour préparer la surface du cerveau à être fixée à la scène, placez le cerveau face ventrale vers le haut et utilisez un outil contondant pour immobiliser doucement la moelle épinière afin de stabiliser le tissu cérébral. Insérez une pince ouverte à un angle d’environ 20 degrés à travers le cerveau jusqu’au fond de la boîte de sorte que les pointes sortent de la surface dorsale du cerveau caudal vers le chiasma optique, et utilisez une lame de rasoir pour couper le long de la pince.

Ensuite, préparez un bloc d’un centimètre cube de gélose à 4 % et étalez une petite goutte de colle dans un rectangle sur la scène. À l’aide d’une pince, soulevez délicatement le cerveau et tamponnez doucement l’excès de liquide avec le bord d’une serviette en papier. Ensuite, placez la surface bloquée sur la colle de sorte que la surface ventrale soit orientée vers la lame lors du tranchage, et poussez doucement le bloc d’agar contre la surface dorsale comme support.

Pour obtenir des tranches cunéiformes avec la racine nerveuse cochléaire du côté épais et les neurones olivocochlaires médians et le noyau médial du corps trapézoïdal du côté fin, placez le disque magnétique avec le cerveau attaché sur le support de platine et placez le support dans la chambre de tranchage d’un vibratome avec la surface ventrale du cerveau orientée vers la lame. Remplissez la chambre avec une solution de tranchage glacée et abaissez la lame dans la solution à bulles de carbogène.

Coupez les tranches caudales à la région d’intérêt pour vous assurer qu’elles sont symétriques. Ensuite, déplacez la scène d’environ 15 degrés d’un côté. Continuez à trancher soigneusement jusqu’à ce que la racine du nerf auditif soit proche de la surface d’un côté et que le nerf facial soit visible à la surface de l’autre côté de la tranche.

Déplacez la platine de 15 degrés vers la position d’origine et éloignez la lame du tissu. Faites pivoter la base de la platine de 90 degrés de manière à ce que le bord latéral du côté mince soit face à la lame, et abaissez la lame de plusieurs centaines de microns avant d’amener lentement la lame près du bord du tissu. Avec la lame légèrement rétractée, abaissez la lame à l’épaisseur souhaitée du bord fin de la tranche.

Éloignez la lame du tissu et faites pivoter la base de la platine vers l’arrière de sorte que la surface ventrale fasse face à la base de la platine. Faites une coupe pour désigner la surface rostrale de la tranche de coin et transférez la tranche sur un morceau de papier d’interface d’un centimètre carré. surface caudale vers le bas.

Le nerf facial doit être visible sur les deux hémisphères de la tranche sur la surface rostrale. Ensuite, déplacez la tranche dans une chambre d’incubation à 35 degrés Celsius pour récupérer pendant 30 minutes.