Stimulation de la différenciation cellulaire neuronale à l’aide de nanotiges d’or

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Neurosciences

0 vues • 4:06 min • July 8th, 2025

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Commencer avec des cellules nerveuses cultivées dans un milieu de différenciation cellulaire.

Ajoutez des nanotiges d’or dans le milieu.

Incuber pour permettre à la cellule d’engloutir la nanotige par un processus appelé endocytose.

Stimulez les nanotiges avec un laser.

Le faisceau laser excite les électrons de surface sur la nanotige. Les électrons excités retournent ensuite à l’état fondamental, libérant de l’énergie thermique.

Cette chaleur stimule les cellules nerveuses à produire des projections soutenues par une protéine cytosquelettique spécifique appelée βIII-tubuline.

Retirez le produit usé.

Fixez les cellules. Ajoutez un détergent adapté pour perméabiliser la membrane.

Ajouter un agent bloquant pour empêcher la liaison non spécifique des anticorps.

Marquez les cellules avec des anticorps primaires qui ciblent la tubuline βIII.

Ajoutez des anticorps secondaires marqués par fluorescence qui interagissent avec les anticorps primaires.

Teindre le noyau avec un colorant fluorescent bleu.

À l’aide de la microscopie à épifluorescence, observez les cellules de couleur rouge avec des noyaux bleus.

Les projections allongées de la cellule indiquent la différenciation des cellules nerveuses.

Cultivez les cellules neuronales NG108-15 dans 10 millilitres de milieu de culture cellulaire dans une fiole T75, puis incuberez-les à 37 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée. Lorsque les cellules sont confluentes à 70 % à 80 %, remplacez le milieu par un milieu chaud et frais.

Après cela, détachez mécaniquement les cellules en frappant doucement le fond de la fiole confluente. Centrifuger une suspension cellulaire pendant cinq minutes à 600 g et remettre en suspension la pastille cellulaire dans 2 millilitres de milieu de différenciation cellulaire chaud. Ensuite, ensemencez les cellules dans une plaque de 96 puits, avec 200 microlitres de milieu de différenciation cellulaire.

Incuber l’échantillon pendant une journée à 37 degrés Celsius. Le lendemain, ajoutez la solution de nanotiges d’or et incubez-la pendant 24 heures supplémentaires. Dans cette procédure, couplez le laser avec une fibre optique monomode et terminez-le avec un connecteur FC. Mesurez la puissance laser de sortie à l’aide d’un wattmètre standard.

Au jour 3 de l’incubation des nanotiges, fixez le connecteur FC au puits, irradiez l’échantillon et contrôlez à température ambiante pendant 1 minute en onde continue à différentes puissances laser. Le jour 5, retirez le milieu de différenciation cellulaire de l’échantillon et fixez-le avec une solution de formaldéhyde à 3,7 % volume par volume pendant 10 minutes.

Ensuite, perméabilisez les cellules avec 0,1 % de volume par volume Triton X-100 pendant 20 minutes. Ensuite, ajoutez 3 % de poids par volume de BSA à l’échantillon pendant 60 minutes pour bloquer les sites de liaison aux protéines qui n’ont pas réagi. Étiquetez l’échantillon avec de l’anti-bêta-3-tubuline pendant la nuit à 4 degrés Celsius.

Le lendemain, incubez les cellules pendant 90 minutes dans l’obscurité, avec un anticorps secondaire approprié. Par la suite, marquez les noyaux cellulaires avec du DAPI pendant 10 minutes, puis imagez l’échantillon par épifluorescence ou microscopie confocale, en utilisant un objectif au moins 20x. Choisissez les filtres du microscope en fonction de l’anticorps secondaire, et sélectionnez le filtre DAPI pour visualiser les noyaux cellulaires.

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Dernière mise à jour : 1 août 2026