Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:06 min • July 8th, 2025
Commencez par ajouter des cellules neuronales à un milieu approprié dans une boîte de culture.
Ajoutez des nanoparticules magnétiques fluorescentes, ou MNP, contenant un noyau magnétique marqué avec un colorant fluorescent.
Pendant l’incubation, la cellule absorbe le MNP par endocytose et devient magnétisée.
Placez un substrat propre à motifs magnétiques dans une boîte de culture. Ce substrat de verre a des motifs géométriques intégrés avec des propriétés magnétiques.
Stérilisez le substrat en l’exposant à la lumière ultraviolette.
Enduisez le substrat de collagène pour favoriser la fixation des cellules.
Ajoutez les cellules chargées de MNP au substrat et incuberez.
Le champ magnétique externe du substrat attire les cellules chargées de MNP, ce qui permet leur fixation.
Ajouter à intervalles réguliers un milieu contenant un facteur de croissance spécifique.
Le facteur de croissance aide les cellules à former des extensions, tandis que le motif magnétique du substrat dirige l’orientation de ces extensions.
Semez 1 million de cellules dans une parabole régulière de 35 millimètres non enrobée. Ajoutez le volume calculé de suspension et de milieu de différenciation MNP dans la boîte pour obtenir la concentration souhaitée de MNP. Mélangez les cellules, les MNP et le milieu de différenciation, puis incubez le plat dans un incubateur humidifié à 5 % de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius pendant 24 heures.
Nettoyez le substrat à motifs avec de l’éthanol à 70 % et placez-le dans une boîte de culture de 35 millimètres dans la hotte. Placez un gros aimant sous le substrat à motifs pendant une minute, puis retirez-le en déplaçant le plat vers le haut et en l’éloignant, et en retirant l’aimant de la hotte. Allumez la lumière ultraviolette pendant 15 minutes.
Pour préparer un substrat en verre recouvert de collagène, diluez le collagène de type I dans un rapport de 1 à 50 dans 30 % d’éthanol. Couvrez le verre avec la solution. Laissez le plat à découvert dans la hotte pendant quatre heures jusqu’à ce que toute la solution s’évapore. Ensuite, lavez-le trois fois dans du PBS stérile. Retirez les cellules de l’incubateur. Centrifuger la suspension cellulaire pendant 5 minutes à 200 g et jeter le surnageant. Remettez les cellules en suspension dans 1 millilitre de milieu de différenciation frais et comptez les cellules à l’aide d’un hémocytomètre.
Ensemencez 10à 5 cellules sur le substrat dans une boîte de culture de 35 millimètres et ajoutez 2 millilitres de milieu de différenciation. Incuber la culture dans un incubateur humidifié à 5 % de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius. Après 24 heures, ajoutez 1 à 100 bêta-NGF murin frais aux cellules. Renouvelez le milieu de différenciation et ajoutez du bêta-NGF frais tous les deux jours.