Etablissement d’une co-culture d’interneurones avec des cellules endothéliales périventriculaires

Prenez une boîte de culture recouverte d’un substrat de culture cellulaire pour faciliter l’adhésion cellulaire.

La parabole contient un insert de culture à un puits sans base attachée à son centre, créant ainsi un compartiment défini. Le contour de ce compartiment est marqué sur la parabole pour observer la migration cellulaire.

Introduisez une suspension cellulaire dans le compartiment qui contient les cellules endothéliales périventriculaires ou PVEC, les cellules qui tapissent les vaisseaux sanguins du cerveau et les interneurones qui migrent le long des PVEC au cours du développement cérébral.

Ajoutez un milieu de co-culture dans la boîte pour maintenir l’humidité et incubez pour faciliter l’adhésion des cellules au substrat.

Retirez l’insert pour éliminer la barrière physique, rafraîchissez le milieu et incubez à nouveau.

Les PVEC prolifèrent, étendant le réseau de cellules endothéliales au-delà de la limite de l’insert.

Les PVEC sécrètent des facteurs qui agissent comme des signaux de guidage, dirigeant les interneurones à migrer le long du réseau PVEC.

La co-culture présentant une migration d’interneurones est prête à être analysée.

Pour effectuer le test de co-culture, suspendez 30 000 interneurones GABAergiques et 30 000 cellules endothéliales périventriculaires humaines dans 70 microlitres de milieu de co-culture. Ensuite, ensemencez cette solution cellulaire à l’intérieur d’un compartiment à un puits. Après 48 heures, retirez l’insert. Incuber la co-culture à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone pendant cinq jours.