Génération d’organoïdes cérébelleux matures à partir de cellules souches pluripotentes induites à l’aide de bioréacteurs à usage unique

Implantez des cellules souches pluripotentes induites par l’homme, ou iPSC, dans un bioréacteur. Les iPSC sont remises en suspension dans un milieu contenant un inhibiteur de l’apoptose cellulaire.

Sous l’effet d’un champ magnétique, la roue verticale du bioréacteur tourne à une vitesse contrôlée, facilitant le contact entre cellules et la formation d’agrégats. Retirez la majeure partie du milieu et ajoutez-y un milieu frais sans l’inhibiteur.

Continuez la culture. Une fois que les agrégats ont atteint une taille optimale, laissez-les se déposer par gravité. Retirez le fluide.

Ajouter un milieu de différenciation contenant des facteurs de croissance, et cultiver avec une vitesse de roue de bioréacteur réduite. Les facteurs de croissance favorisent la différenciation neuronale au sein des agrégats.

Ensuite, ajoutez un milieu frais complété par des facteurs de croissance et des chimiokines qui induisent le développement de progéniteurs cérébelleux.

Progressivement, les progéniteurs cérébelleux s’organisent en couches distinctes au sein des agrégats, formant des organoïdes cérébelleux précoces.

Enfin, ajoutez un milieu neuronal contenant des facteurs neurotrophiques spécifiques.

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